ABO/RhD血型定型檢測試劑卡操作指南
- 分類：操作指南
- 作者：
- 來源：
- 發布時間：2021-12-03
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【概要描述】ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。
ABO/RhD血型定型檢測試劑卡操作指南
【概要描述】ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。
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詳情
【試驗目的和原理】
ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。
對于成年個體被檢者，紅細胞上的A和/或B抗原與血漿中的抗A和/或抗B抗體存在一種對應關系。其獨特性質在于：紅細胞上缺乏A和/或B抗原，則血清中存在與所缺乏的抗原對應的強反應性抗體，如紅細胞上缺乏A抗原，則可以預見血漿中存在抗A抗體。
常規的ABO定型必須包括正定型（紅細胞定型）和反定型（血漿定型），并將正反定型結果相互驗證，只有正反定型結果一致時才能準確定型。
Rh陽性和Rh陰性的鑒定是通過檢測被檢者的紅細胞上是否有D抗原，有D抗原為Rh陽性，沒有D抗原則為Rh陰性。
ABO/RhD血型定型檢測試劑卡采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，將生物化學的凝膠分子篩過濾技術、離心技術和血型血清學的抗體特異性結合在一起，其中 抗A凝膠管中灌注了含抗A抗體的凝膠，抗B凝膠管中灌注了含抗B抗體的凝膠，抗D凝膠管中灌注了含IgM抗D抗體的凝膠。A細胞、B細胞及Ctl管中灌注 了不含血型抗體的凝膠，抗A、抗B及抗D凝膠管用于紅細胞上A、B及D抗原檢測，而A細胞、B細胞用于檢測血漿中的抗體，Ctl管用于自身對照。當抗原抗 體反應時，凝集的紅細胞在離心力的作用下不能通過凝膠而留在凝膠上層或游離在凝膠中，呈現陽性反應；而抗原抗體沒有反應時，未凝集的紅細胞在離心力的作用 下可通過凝膠而沉積在微柱凝膠管的底部，呈現陰性反應。
【ABO/RhD血型定型檢測試劑卡的用途】
1. 用于輸血前檢測
(1) 鑒定ABO血型，以備選擇ABO血型相配合的血液用于交叉配血。
(2) 鑒定RhD血型，以備選擇RhD血型相配合的血液用于交叉配血。
2. 用于圍產期檢查
(1) 用于產前夫婦的ABO、RhD血型檢測，進行新生兒溶血病產前預測。
(2) 用于產后母子的ABO、RhD血型檢測，進行新生兒溶血病產后診斷。
3. 用于常規ABO、RhD血型化驗檢查，如健康體檢等。
【樣本要求】
1. 建議使用抗凝的血樣，尤其是EDTA抗凝管采集的血樣，需要量2ml 。（EDTA抗凝采血管為紫帽管）。
2. 血液樣本在采集后48小時以內檢測。
【所需儀器設備及耗材】
1. ABO、RhD血型定型檢測試劑卡
2. 血型血清學離心機（用于離心分離血漿、洗滌紅細胞）
3. 微柱凝膠卡離心機
4. 微量移液槍及吸頭
【試驗操作】
按照下列步驟進行操作
一、被檢血液樣本的處理及反定型A型、B型紅細胞的準備
1. EDTA抗凝的血液樣本離心3000rpm 1分鐘，將上清血漿轉入一支12×75mm 試管中，余下的壓積紅細胞備用。如果血漿有不溶物（如混入的紅細胞）或不澄清透明，則需要將血漿再次離心，直到澄清透明不含不溶物為止。
2. 另取一支12×75mm試管中，加入0.1ml上述步驟1中的壓積紅細胞 ，用生理鹽水洗滌一次，棄上清，得到壓積紅細胞。
3. 在一支12×75mm試管中，加入1ml生理鹽水（或LISS液），加入步驟2中得到的壓積紅細胞10μl，混勻得到0.8~1%的被檢紅細胞懸液。
4. 將反定型A型、B型紅細胞用生理鹽水或LISS液配制成0.8~1%濃度。
二、ABO、RhD定型
1. 取ABO/RhD血型定型檢測試劑卡一片，注意檢查外觀，確保凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會干涸。將符合要求的卡進行標記，按照試驗需要撕開封口膜。
2. 用微量移液槍分別向抗A、抗B、抗D孔及Ctl孔的每孔樣品槽中沿樣品槽內壁呈45°角緩慢加入50μl 0.8~1%濃度的被檢者紅細胞懸液。
3. 向A細胞孔中加入50μl 0.8~1%的A型紅細胞懸液。
4. 向B細胞孔中加入50μl 0.8~1%的B型紅細胞懸液。
5. 分別向A細胞、B細胞、Ctl孔中加入25μl 被檢者血漿。
6. 在臺面交替輕扣卡左下角和右下角，確保所加入的液體在卡的樣品槽中呈水平狀態，而不是偏向一側。
7. 將卡放入微柱凝膠卡離心機離心，LB-3000低速離心機一檔離心900rpm 2分鐘，再1500rpm 3分鐘，判讀結果并記錄。
【結果判讀及解釋】
1. 反應陰、陽性的判讀
【注意事項】
1. 建議在使用凝膠卡前先離心再應用。
2. 若凝膠卡封口開裂、孔中凝膠干涸或有氣泡，不可使用。
3. 撕開凝膠卡封口膜時，不能用力過猛，以免造成凝膠微孔間的交叉污染。
4. 樣本采集后應盡快檢測，若試驗需要延遲，應將樣本置2~8℃下短期儲存。
5. 紅細胞懸液的濃度為0.8~1%，濃度過高或過低會影響檢測結果。
6. 溶血、脂血、細菌污染等情況的標本會影響檢測結果。
7. 血漿或血清標本須充分離心去除纖維蛋白，否則會阻止紅細胞在微柱凝膠中的沉降，出現假陽性。
8. 人源血液樣本存在潛在的傳染性，凝膠卡使用后按醫療生物垃圾處理。
9. 在Ctl孔（自身陰性對照）結果為陽性時，試驗結果無效。可能原因是由于被檢紅細胞已經致敏IgM抗體導致自發凝集，此時可以用DTT將已經致敏到紅細胞上的IgM抗體破壞后再行 ABO、RhD血型檢測。
10. 抗D凝膠不能鑒定弱D、部分D（如DⅥ）抗原。對于患者，如果抗D凝膠管中患者的紅細胞反應為陰性，則確定為RhD陰性。
11. 若出現＜2+的弱陽性反應，須做進一步試驗才能準確定型，即確認弱反應是由于被檢者的抗原減弱還是凝膠微孔之間的交叉污染引起。
12. 若出現混合視野反應，需要了解被檢者近期3個月內是否有輸血史，或被檢者是否為骨髓移植患者。
13. 由于6月齡以下的嬰兒其血漿/血清中不似成人一樣存在可預見的抗A/抗B抗體，因此只做正定型不做反定型。
【ABO正反定型不一致原因分析】
如果血型定型正反定型結果不一致時，則不能準確定型，需要分析產生不一致的原因。 引起正反定型不一致的原因如下：
（一）正定型出現弱反應或缺失抗原
1. A亞型、B亞型或AB亞型。
2. 白血病導致A或B抗原減弱。
3. 何杰金病（Hodgkin’s）有時會抑制抗原表達，與白血病類似。
4. 由于某種疾病（如腹腔癌、胰腺癌）導致血漿中存在大量的血型物質，中和抗A或抗B抗體，引起正定型為假陰性或弱陽性。 需要將正定型的紅細胞用生理鹽水洗滌后再次定型可解決此問題。
5. 骨髓移植。
6. 非ABO同型輸血。
（二）正定型紅細胞上多余的抗原反應
1. 自身凝集紅細胞、抗體致敏紅細胞導致。
2. 細胞未洗滌，血漿蛋白引起的假陽性反應。
3. 細胞未洗滌，血漿中存在針對正定型試劑中某種成分的抗體導致。
4. 骨髓移植。
5. 獲得性B。
6. B（A）現象。
7. ABO非相合輸注。
（三）正定型出現混合視野反應
1. 近期輸血。
2. 骨髓移植。
3. 異卵雙胞胎或雙受精卵產生的嵌合體。
4. 胎兒和母體出血。
（四）反定型血清中出現弱反應或反應缺失
1. 年齡相關：新生兒以及小于6月齡的嬰兒以及老年人。
2. ABO亞型有亞型抗體，如A2、A2B型人的抗A1。
3. 低球蛋白血癥（如白血病人、使用免疫抑制劑患者、免疫缺陷患者）。
4. 移植患者使用抗排異藥物。
5. 雙胞胎或雙受精卵產生的嵌合體。
（五）反定型出現多余的抗體反應
1. 冷自身抗體。
2. 特異性冷同種抗體A。
3. 血清中存在針對試劑紅細胞保存液成分的抗體。
4. 某些疾病導致球蛋白水平增高（多發性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、Hodgkin’s 淋巴瘤）引起緡錢狀凝集。
5. 輸用大分子血漿擴容劑。
6. 非ABO同型的移植。
7. 靜脈注射免疫球蛋白。
（六）技術方面的錯誤
1. 血液樣本被污染，如混入其他人樣本。
2. 被檢紅細胞的濃度過高或過低。
3. 忘記在反應體系中加入檢測樣本或試劑。
4. 未按照試劑使用說明進行試驗。
5. 離心步驟離心時間不足或離心時間超時。
6. 對試驗結果記錄或判讀不正確。
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